Bakteerikasvun mittaamiseen on monia tapoja, ja yksi tapa on monimutkaisempi kuin toinen. Vaikka joskus mittausten johdonmukaisuus on jätettävä huomiotta, helpoin tapa riittää mittaamaan bakteerien kasvun tarkasti, joten sitä käytetään usein. Yleisimmin käytettyjä menetelmiä ovat bakteerien seuranta ja laskeminen, kuivan tai märän massan mittaaminen sekä sameuden/sameuden mittaaminen. Koulusi laboratoriossa tulisi olla työkalut ja laitteet, joita tarvitaan vähintään yhden näistä kokeista.
Vaihe
Menetelmä 1 /3: Bakteerien seuranta elää
Vaihe 1. Valmista ainesosat
On olemassa monia erikoistyökaluja, jotka on valmisteltava ja joita ei välttämättä ole saatavilla biologian laboratoriossa. Valmistele kaikki laitteet ja astiat ennen kokeen suorittamista, jotta prosessin aikana ei aiheudu ongelmia. Sinun on tiedettävä jokainen käytetty ainesosa heti ja tämän kokeilun perusehdot.
- Valmistele laskukammio. Siinä on sisäänrakennettu kammio, mikroskoopin lasi ja mikroskooppi, joten se on helppo asentaa ja käyttää. Voit ostaa sen laboratorio- tai koulutarvikekaupasta. Tässä työkalussa on oltava ohjeet, jotka opastavat sinua koko prosessin aikana.
- Valmista kaavakuppi tai levityskuppi. Molempien näiden säiliöiden avulla voit seurata sisällä olevia bakteereja.
- Kulttuuri on termi, jota käytetään kuvaamaan organismien kasvua kokeessa.
- Liemi on nestemäinen väliaine, jossa viljely kasvaa.
Vaihe 2. Käytä kaatolevy- tai levityslevymenetelmää
Voit myös laittaa bakteerit suoraan maljalle katseltavaksi mikroskoopilla. Kaada viljelmä lautaselle ja aseta se mikroskoopin alle. Seuraa bakteerisolujen määrää.
Vaihe 3. Varmista, että pitoisuusannos on oikea
Jos niitä on liikaa, bakteerit kerääntyvät toistensa päälle ja saatat laskea väärin. Laimenna viljelmä sekoittamalla lisää lientä. Jos niitä on liian vähän, laskennan tulokset eivät ole tarkkoja. Siivilöi liemi suodatusjärjestelmällä.
Vaihe 4. Laske bakteerit
Viimeinen vaihe on laskea bakteerit yksi kerrallaan. Katso laskentatilassa olevan suurennuslasin läpi ja kirjoita näkemiesi bakteerien määrä. Vertaa tuloksia muiden testien tuloksiin.
Menetelmä 2/3: Kuivan ja märän massan mittaaminen
Vaihe 1. Varmista, että sinulla on oikeat laitteet
Tämä menetelmä käyttää kalliita laitteita ja paljon aikaa. Jos laboratoriossasi ei ole tarvittavia laitteita, kannattaa käyttää toista menetelmää. Jos laboratoriosi on kuitenkin riittävän hyvin varusteltu, suosittelemme tätä menetelmää, koska se antaa johdonmukaisemmat tulokset. Tässä menetelmässä tarvitset:
- Hydraulinen painovoimainen kiertoilmauuni
- Alumiininen punnitusastia
- Pullo (laboratoriopullot)
- Keskipakokone (sentrifugi) tai laboratoriosuodatusjärjestelmä
Vaihe 2. Varmista, että viljely on pullossa
Lisää kulttuuri kurpitsaan. Tässä vaiheessa kulttuurin tulisi olla liemi, vaikka myöhemmin se erotetaan uudelleen.
Vaihe 3. Kuivaa alumiininen punnitusastia laboratoriouunissa
Sen sijaan voit käyttää selluloosa -asetaattisuodatinkalvoa, jonka halkaisija on 47 mm ja huokoskoko 0,45 µm. Mitä punnitusastiaa käytätkin, punnitse se, koska se on vähennettävä myöhemmin bakteerisoluja punnittaessa.
Vaihe 4. Sekoita viljelmää pullossa, kunnes se on tasaisesti sekoittunut
Kenno uppoaa luonnollisesti painovoiman vaikutuksesta, ja sitä on sekoitettava, jotta se levittyy tasaisesti pulloon. Näin voit ottaa lisää näytteitä.
Vaihe 5. Erota bakteerisolut liemestä sentrifugilla
Tämä työkalu pyörii pulloa ja tasapainottuu nopeasti niin, että se valuttaa liemen ja jättää viljelmän pulloon.
Vaihe 6. Kaavi tahna pois kurpitsasta ja laita se punnitusastiaan
Heitä liemi pois, koska et tarvitse sitä enää. Älä kuitenkaan vielä päästä eroon kurpitsasta, koska sitä käytetään edelleen.
Vaihe 7. Huuhtele keskipakokone ja kaada huuhteluvesi astiaan
Pudota huuhteluvesi pullossa bakteerisolujen päälle märkäpainon saavuttamiseksi.
Vaihe 8. Etsi kuivapaino
Kuivapainon mittaamiseksi aseta astia uuniin ja kuivaa 100 ° C: ssa 6-24 tuntia käytetyn uunin ja/tai punnitusastian ohjeiden mukaisesti. Varmista, että lämpötila ei ole liian korkea, jotta bakteerit eivät pala. Punnitse bakteerit, kun olet valmis, ja älä unohda pienentää tulosta punnitusastian painolla.
Tapa 3/3: Sameuden mittaaminen
Vaihe 1. Valmistele tarvittavat laitteet
Tarvitset valonlähteen ja spektrofotometrin. Molempia voi ostaa laboratoriotarvikeliikkeistä. Spektrofotometrissä tulee olla ohjeet, jotka opastavat sinua käyttämään laitetta käyttämäsi mallin mukaan. Spektrofotometrin hinta on melko edullinen ja helppokäyttöinen, joten siitä voi tulla yksi yleisimmin käytetyistä menetelmistä bakteerikasvun mittaamiseksi.
Vaihe 2. Valaise näyte
Laymanin termin mukaan sameus on näytteen sameusaste. Sinun on saatava sameuden mittausluku, joka mitataan NTU: na (nephelometric Turbidity Unit). Tämä työkalu on kalibroitava, ennen kuin se voi mitata näytteen tarkasti.
Vaihe 3. Kirjaa tulokset
Näytteen sameuteen vaikuttaa bakteerien määrä. Spektrofotometri kertoo myös lähetyksen prosenttiosuuden (%T). Tämä luku kasvaa, jos sameus vähenee. Vertaa tuloksia muiden testien tuloksiin bakteerien kasvun mittaamiseksi.
Varoitus
- Koska olet tekemisissä bakteerikolonian kanssa, noudata varotoimia käyttämällä suojavarusteita, kuten suojalaseja ja käsineitä. On myös hyvä käyttää maskia, varsinkin jos et tiedä, minkä tyyppisiä bakteereja tutkitaan.
- Noudata varotoimia ennen minkään tyyppisten bakteerien, myös vaarattomien, käsittelyä. Varmista, että kaikki kehosi avoimet haavat on peitetty kokonaan ennen aloittamista.
